Оптимізація процесів культивування у виробництві пробіотичних препаратів на основі лактобацил

Валін 5, 5±0. 2 2, 1±0. 1 2, 4±0. 1 1, 5±0. 1 1, 2±0. 1 2, 1±0. 1 1, 8±0, 1

Метіонін 0 2, 5±0. 1 4, 4±0. 1 1, 1±0. 1 1, 1±0. 1 3, 0±0. 1 3, 1±0, 1

Ізолейцин 4, 9±0. 2 0, 84±0. 01 0, 9±0. 02 1, 3±0. 1 1, 5±0. 1 1, 2±0. 1 1, 1±0, 1

Лейцин 10±0. 2 8, 8±0. 2 10, 9±0. 5 5, 9±0. 2 7, 1±0. 3 9, 3±0. 5 9, 3±0, 2

Тірозін 0 0 0 0 0 0 0

Фенілаланін 4, 8±0. 2 4, 3±0. 2 5, 8±0. 1 3, 0±0. 2 5, 5±0. 2 4, 6±0. 2 5, 7±0, 2

Триптофан 0 0 0 0 0 9, 9±0. 2 0

Гістідін 6, 5±0. 2 15, 7±0. 5 19, 6±0. 8 12, 6±0. 8 13, 3±0. 5 16, 7±0. 5 16, 4±0, 5

Орнітін 3, 5±0. 2 0 4, 5±0. 1 1, 6±0. 1 2, 8±0. 1 1, 3±0. 1 3, 6±0, 1

Лізін 4, 6±0. 2 1, 9±0. 1 5, 8±0. 2 1, 8±0. 1 1, 6±0. 1 2, 0±0. 1 4, 7±0, 2

Аргінін 1, 2±0. 2 0 0 0 1, 1±0. 1 0 0

Разом 58, 3 41, 4 62, 0 38, 4 45, 8 58, 3 54, 7

% контроля 100 71, 0 106, 3 65, 8 78, 5 100 93, 8

 

Таким чином, проведені нами експерименти дозволили встановити ряд особливостей розвитку культури L. delbrueckii subsp. bulgaricus 51 на середовищах різного складу, продемонструвати вплив технологічних процесів, пов'язаних із приготуванням виробничих середовищ, а також показати рівень впливу джерел органічного азотного живлення і головну роль окремих амінокислот у формуванні клітинної маси та її біологічних характеристик.

Проведені нами роботи дозволили відновити біологічну активність вихідного продуцента й одержати новий варіант культури, що перевершував вихідний штам за рядом показників (L. delbrueckii subsp. bulgaricus 86).

Перевірка здатності живих клітин, їх лізатів, а також культуральних рідин до гальмування росту пухлини саркоми S-180 підтвердила збереження і стабілізацію вихідного протипухлинного потенціалу культури L. delbrueckii subsp. bulgaricus 51 і у варіанта L. delbrueckii subsp. bulgaricus 86. Нами також переконливо показана залежність формування носіїв протипухлинної активності в клітинах лактобацил від складу поживного середовища і, насамперед, від природи органічного джерела азотного харчування. Цілком ймовірно, соєве борошно і продукти його ферментативної переробки є джерелом сполук, що індукують утворення субстанцій, які відповідальні за прояв протипухлинної дії (табл. 2).

 

Таблиця 2

Вплив живих клітин і продуктів метаболізму штамів L. delbrueckii subsp. bulgaricus 51 і L. delbrueckii subsp. bulgaricus 86 на гальмування росту саркоми S 180 у мишей при пероральному введенні

 

Зразок Відсоток гальмування росту пухлини (%) через 7 діб

MRS Гідролізати

Казеїна + соєвого борошна

Гідролізати казеїна

1 2 1 2 1 2

Живі клітини 14±0. 8 12±0. 8 65±2. 3 76±3. 1 17±1. 1 22±1. 2

Лізат (лізис “Рефінзимом”) 16±0. 9 18±1 80±3. 8 89±2. 2 20±1. 1 36±1. 2

Лізат (лізис “лізоцимом”) 15±1. 1 12±0. 7 72±3. 6 76±3. 4 32±1. 3 34±1. 1

Культуральна рідина 21±1, 0 16±0. 8 47±1. 9 54±2. 1 35±1. 2 35±1. 3

Примітка: 1. L. delbrueckii subsp. bulgaricus 51; 2. L. delbrueckii subsp. bulgaricus 86

Варіанти клітин і їх лізати, отримані після культивування на ферментаційних середовищах, що містять тільки ферментолізат казеїну, виявляли протипухлинну активність у 2, 4-4 рази меншу.

Середовище МRS, яке забезпечує найбільше накопичення клітинної маси обох штамів, сприяло блокуванню утворення речовин, відповідальних за протипухлинну активність. Можливо, ця реакція обумовлена окремими метаболітами, у синтезі яких беруть участь амінокислоти, що входять до складу пептону.

Слід зазначити, що в культуральній рідині обох штамів зберігався досить високий рівень протипухлинної дії, яка у випадку використання казеїнових ферментолізатів більш, ніж у 1, 5 рази перевищувала здатність до гальмування росту пухлини живих клітин і їх лізатів.

Поряд із протипухлинною активністю одним із головних показників терапевтичного потенціалу біомаси було визначення імуностимулюючої дії, для характеристики якої був обраний індекс стимуляції фагоцитозу.

Середовища культивування, до складу яких входили ферментолізати казеїна, забезпечують утворення клітинної маси з вираженою імуностимулюючою дією. Лізати культури L. delbrueckii subsp. bulgaricus 86 виявляли значно більш виражену здатність до імуностимуляції в порівнянні з продуктами ферментоліза клітин L. delbrueckii subsp. bulgaricus 51 (табл. 3).

Гідролізати клітин обох штамів, отримані при культивуванні продуцентів на середовищі MRS, виявляли, як і у випадку визначення протипухлинної дії, мінімальну імунологічну активність.

 

Таблиця 3

Імуностимулюючий ефект лізатів штамів L. delbrueckii subsp. bulgaricus 51 і L. delbrueckii subsp. bulgaricus 86 в залежності від умов культивування

Середовища Рівень активності при розведенні: 

10-5 10-6 10-7

1 2 1 2 1 2

Ферментолізат казеїну + + + + + + + + + + +