Застосування полімеразної ланцюгової реакції для діагностики хламідіозу свиней

При повторному досліджені відібраних 40 клінічних проб від 27 кнурів (5 з них досліджувались до оздоровлення) та 23 свиноматок через 53 доби після завершення оздоровчих заходів ПЛР-методом отримано негативний результат на хламідіоз, що вказує на високу ефективність застосованої схеми оздоровчих заходів.

Схема оздоровлення від хламідіозу з застосуванням тетрацикліну “Оху-100” випробувана на свинопоголів'ї племферм ПАФ “Україна” та ТОВ “Довіра” Великобагачанського р-ну Полтавської області.

Через 73 доби, після завершення лікувальних заходів повторно відібрано 20 проб зскрібків від 6 кнурів і 14 свиноматок племсвиноферми ТОВ “Довіра”. При цьому позитивних результатів дослідження на хламідіоз не виявлено. Між тим, після завершення оздоровчих заходів через 116 діб повторно досліджено 25 зскрібків від 16 кнурів і 9 свиноматок племсвиноферми ПАФ “Україна”, серед яких 9 тварин знову були позитивними на хламідіоз (24 тварини досліджувались до оздоровлення, при цьому було виявлено 14 позитивних результів). Такі результати свідчать про недостатню ефективність оздоровчих заходів, що пояснюються в першу чергу застосуванням відмінної від запропонованої нами схеми антибіотикотерапії, а саме – препарат “Oxy-100” ін'єктували у вказаних дозах троєкратно, але не з 5 – 7-денним інтервалом, а підряд на протязі 3 діб. Взв'язку з цим були додатково проведені оздоровчі заходи за розробленою нами схемою троєкратного застосування тетрацикліну пролонгованої дії з 5 – 7-денним інтервалом повторно досліджено 9 проб, від указаних свиней через 36 діб. Результати ПЛР-аналізу на хламідіоз цього разу були негативними.

Отже результати польових дослідів по оздоровленню від хламідіозу свиней шести сільськогосподарських підприємств свідчать про те, що розроблені нами схеми 2 – 3 -кратного застосування пролонгованих тетрациклінів з 5 – 7-денним інтервалом є достатньо ефективними. В той же час результати цих дослідів підтверджують, що метод ПЛР-аналізу може застосовуватись не лише для оперативної експрес-діагностики хламідіозу, а й для контролю ефективності проведених лікувально-оздоровчих заходів.

 

 

1. У дисертації наведено нове вирішення проблем лабораторної діагностики хламідіозу свиней. Існуючі насьогодні методи недостатньо ефективні, що в значній мірі пов'язано з їх низькою чутливістю і специфічністю, тривалістю та трудомісткістю проведення досліджень.

Впровадження методу ПЛР для діагностики хламідіозу в практику лабораторій ветеринарної медицини дає можливість постановки точного діагнозу на дане захворювання за короткий час (4 – 4, 5 год) при дослідженні проб клінічного або патологічного матеріалу, відібраного від свиней усіх вікових і статевих груп в будь-якій стадії розвитку інфекційного процесу, включаючи латентний перебіг, а також виявлення хламідієносіїв.

2. Порівняльним аналізом секвенованих послідовностей нуклеїнових кислот гена, який кодує 16S рибосомальної РНК Chlamydia trachomatis, Chlamydia suis і Сhlamydiophila psittaci, виявлено рівень гомології? 93%, що свідчить про консервативність вказаного гена для різних видів збудника хламідіозу.

3. Дослідженням специфічних та контрольних хламідійних антигенів для РЗК і орнітозних алергенів для внутрішньошкірної проби, 6 проб патологічного матеріалу від поросят-гнотобіотів з досліду по експериментальному відтворенню хламідіозу та 530 проб біоматеріалу від 442 свиней різних вікових та статевих груп встановлено, що для діагностики хламідіозу свиней за методом ПЛР є придатним набір реагентів “Полімік” ТУ-9398-405-17253567-96 виробництва Московської науково-виробничої фірми “Літех”, призначений для діагностики хламідійних інфекцій людини, в якому підібрана система праймерів, комплементарних ділянкам генів, що кодують 16S рибосомальної РНК хламідії.

4. Дослідження специфічних та контрольних хламідійних антигенів для РЗК і орнітозних алергенів для внутрішньошкірної проби свідчать про високу чутливість і специфічність методу ПЛР. Індикація ДНК хламідій відбувається в розведеннях специфічних антигенів у 1000 – 8000 разів вищих за граничний титр розведень в РЗК при відсутності в контрольних препаратах.

5. Порівняння результатів досліджень на хламідіоз проб клінічного матеріалу від інфікованих свиней за загальновживаними методами і результатами ПЛР свідчать, що чутливість РЗК складає? 27%, методу виділення і культивування хламідій на білих мишах та курячих ембріонах? 90%, мікроскопічного? 70% в порівнянні з результатами ПЛР, які прийняті за 100%.

6. Встановлено, що для прижиттєвої діагностики хламідіозу за методом ПЛР придатні зскрібки з слизової оболонки статевих органів або прямої кишки та супернатант 10-20% відцентрифугованих супензій сперми, зависі фекалій, а від загиблих та забитих свиней і аборт-плодів – супернатант відцентрифугованих 10% суспензій з біоптатів (шматочки головного мозку, легень, селезінки, печінки та нирок) на фізіологічному розчині.

7. В експерименті по штучному відтворенню хламідіозу на поросятах-гнотобіотах встановлено, що розвиток інфекції протікає без прояву клінічних ознак (температура тіла і показники загального аналізу крові знаходяться в межах фізіологічної норми) та видимих патологоанатомічних змін в органах. Разом з тим, гістологічними дослідженнями встановлено що хламідії викликають набряк мозкової тканини, потовщення стінок кровоносних судин та розширення навколосудинних просвітів головного мозку, розширення міжальвеолярних перетинок та потовщення стінок кровоносних судин легень.

8. На основі розроблених схем лікувально-оздоровчих заходів при хламідіозі свиней і контролю їх ефективності по індикації збудника за методом ПЛР встановлено, що