Застосування полімеразної ланцюгової реакції для діагностики хламідіозу свиней

9. За результатами впровадження методу ПЛР для виявлення хламідій у свиней розроблені “Методичні рекомендації по діагностиці хламідіозу свиней методом полімеразної ланцюгової реакції з застосуванням набору фірми “Літех”, які затверджені Головою Державного департаменту ветеринарної медицини Міністерства аграрної політики України.

 

 

1. Ксьонз І. М. Застосування методу полімеразної ланцюгової реакції для діагностики хламідіозу у кнурів-плідників // Вісник СДАУ. – Суми – 1999. – Вип. 4. – С. 113-115.

2. Ксьонз І. М. Експериментальне відтворення хламідіозу свиней на поросятах-гнотобіотах // Міжвідомч. темат. наук. зб. “Ветеринарна медицина”. – Харків: ІЕКВМ УААН. – 1999. – Вип. 76. – С. 68-71.

3. Ксьонз І. М. Хламідійна інфекція свиноматок та альтернативний метод її діагностики // Вісник ПДСІ. – Полтава. – 2000. – Вип. 5. – С. 41-42.

4. Ксьонз І. М., Балацький В. М., Метлицька О. І. Експрес-метод діагностики хламідіозу свиней // Тваринництво України. – 2000. – № 11. – 12. – С. 21.

Дисертант приймав безпосередню участь в модифікації, випробуванні та впровадженні методу ПЛР для діагностики хламідіозу свиней.

5. Ксьонз І. М. Полімеразна ланцюгова реакція як альтернативний метод діагностики хламідійних інфекцій свиней // Матер. Всеукр. наук. -практ. конф. молод. вчених “Проблеми патології тварин та шляхи її вирішення”. – К., ІВМ УААН. – 2000. – С. 25-29.

6. Настенко В. Д., Гавшин О. О., Хандкарян В. М., Ксьонз І. М., і ін. Новий біотехнологічний метод діагностики хламідіозу свиней та його переваги // Ветеринарна медицина України – 2001. – №3. – С. 36-37.

Дисертант провів дослідження по діагностиці хламідіозу свиней за методом ПЛР і загальноприйнятими лабораторними методами.

7. Ксьонз І. М. Застосування полімеразної ланцюгової реакції для діагностики інфекційних захворювань на прикладі ПЛР-аналізу хламідіозу свиней // Тези ІІІ Міжнарод. конф. “Біоресурси та віруси”. – К.. – 2001. – С. 31.

8. Ксьонз І. М., Настенко В. Д., Курман А. Ф. і ін. Методи відбору проб для ПЛР-аналізу хламідіозу свиней // Проблеми зооінженерії та ветеринарної медицини. – Харків, ХДЗВА. -2001. – Вип. 9 (33). – Част. 1. – С. 113-118.

Дисертант розробив і випробував методи відбору проб для діагностики хламідіозу свиней за ПЛР-методом.

 

Ксьонз І. М. Застосування полімеразної ланцюгової реакції для діагностики хламідіозу свиней. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16. 00. 03 – ветеринарна мікробіологія та вірусологія. Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини УААН, Харків, 2002.

В дисертації викладено результати досліджень по застосуванню та науково-експериментальному обгрунтуванню методу полімеразної ланцюгової реакції для діагностики хламідіозу свиней з застосуванням наборів реагентів, призначених для діагностики хламідіозу людини, розробці методів відбору проб клінічного матеріалу для ПЛР-аналізу від свиней різних статевих і вікових груп та вивченню діагностичної цінності цього методу.

Проведені успішні випробування методу ПЛР для діагностики хламідіозу свиней в лабораторному та польових дослідах, а також розроблені схеми оздоровчих заходів проти цієї інфекції.

Розроблені “Методичні рекомендації по діагностиці хламідіозу свиней методом полімеразної ланцюгової реакції з використанням набору фірми “Літех” затверджені Головою Державного департаменту ветеринарної медицини Міністерства аграрної політики України.

Ключові слова: хламідіоз, діагностика, ПЛР-аналіз, ампліфікація, електрофорез, праймери, полімераза, дезоксирибонуклеозидтрифосфати, зскрібок.

 

Ксёнз И. Н. Применение полимеразной цепной реакции для диагностики хламидиоза свиней – Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук по специальности 16. 00. 03 – ветеринарная микробиология и вирусология. – Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины УААН, Харьков, 2002.

В диссертации изложены результаты исследований по применению и научно-экспериментальному обоснованию метода полимеразной цепной реакции для диагностики хламидиоза свиней с использованием наборов реагентов, предназначенных для диагностики хламидиоза человека, разработки методов отбора проб клинического материала для ПЦР-анализа от свиней разных половых и возрастных групп и изучению диагностической ценности этого метода.

Проведены успешные испытания метода ПЦР для диагностики хламидиоза свиней в лабораторных и полевых опытах, а также разработаны схемы оздоровительных мероприятий против этой инфекции.

Разработаны “Методические рекомендации по диагностике хламидиоза свиней методом полимеразной цепной реакции с использованием набора фирмы “Литех” утверждённые Председателем Государственного департамента ветеринарной медицины Министерства аграрной политики Украины.

Ключевые слова: хламидиоз, диагностика, ПЦР-анализ, амплификация, электрофорез, праймеры, полимераза, дезоксирибонуклеозидтрифосфаты, соскоб.

 

I. M. Ksyons. Using the Polymerase Chain Reaction for Diagnosing Chlamydiosis in Pigs. – Manuscript.

Dissertation for the Candidate degree in Veterinary Sciences on the speciality 16. 00. 03 – veterinary microbiology and virology. – Institute for Experimental and Clinical Veterinary Medicine of the UAAS, Kharkov, 2002.

Development and promoting highly perceptible biotechnological methods for diagnosing pig diseases into practical work of veterinary medicine laboratories is one of the conditions for intensifying pig-breeding branch. Taking into account the fact that pig Chlamydiosis causes considerable economic damage to the country's pig-breeding and that the existing laboratory methods for diagnosing this disease aren't efficicient enough, development and promoting the PCR-method of diagnosing pig Chlamydiosis into the laboratory veterinary practice is of decisive importance for the efficient control of this infection.

Particularly important is the fact, that the PCR-method for diagnosing pig Chlamydiosis, due to its high sensitivity and specificity, permits detecting both animals suffering the early stages of the disease and Chlamydiosis – carriers. This detection is impossible at using any other laboratory methods for diagnosing the given disease.

Besides, the PCR-method permits obtaining the unequivocal result within the period of 4- 4. 5 hours since the moment of delivering the studied samples into the Laboratory, which helps taking all the necessary measures for liquidating the Chlamydial infection source.

The PCR-method is available for the individual diagnostics of Chlamydiosis, whereas the majority of other laboratory methods for diagnosing the given disease, including the cultural method, are only available for the group diagnostics.

There is one more fact worth consideration. Preservation of the alive agent in a sample is not necessary for the mentioned laboratory diagnostics method, thus making the samples transportation to the laboratory much easier and excluding the possibility of infecting the PCR-laboratory staff in the process of analyzing the samples.

The dissertation work is devoted to the development and science-experimental foundation of the PCR-method for diagnosing pig Chlamydiosis using the reagents sets destined for diagnosing human Chlamydiosis, to developing methods for selecting samples of clinical and pathological material for the PCR-analysis from pigs belonging to different sex and age groups as well as to studying the method's diagnostic value.

The work also upon certain problems of studying pig Chlamydiosis pathogenesis by means of hystological analyses and by studying the smearprints of brain and lung tissues taken from gnotobiotic piglets artificially infected with the Chlamydiae-containing material.

The results of the research work are the following:

Determined is the general possibility of using the polymerase chain reaction method for diagnosing pig Chlamydiosis.

Reagents are selected and the best parameters are adjusted for extracting DNA from the samples of clinical and pathological materials as well as for executing both the polymerase chain reaction and electrophoresis in agarose gel.

Methods are developed for selecting samples of pathological material from dead or slaughtered pigs and aborted foetuses and for their primary processing before the

PCR-analysis.

Methods are developed for selecting samples of clinical material from reproduction boars, gilts and sows and for their primary processing before the PCR-analysis.

Successful testing was conducted for the PCR-diagnosing of Chlamydiosis in the laboratory and field experiments. The PCR-method was used for analyzing 530 samples from 442 pigs belonging to different sex and age groups. In the course of the testing 180 positive and 337 negative results were obtained.

Schemes were developed for therapeutic measures directed against pig Chlamydiosis based on prolongated action with further control of their efficiency by means of the PCR-analysis.

Developed are “Methodological recommendations for diagnosing pig Chlamydiosis by means of the polymerase chain reaction method using the reagents set of the “Litech” firm”. The recommendations are approved by the State Veterinary Medicine Department at the Ministry for Agrarian Policy of Ukraine.

A number of amendments and additions concerning 15 points of the project “Instructions to the measures for prophylaxis and liquidation of farm animals Chlamydiosis” are prepared and presented to the State Veterinary Medicine Department of the Ministry for Agrarian Policy of Ukraine.

Key words: Chlamydiosis, diagnostics, PCR-analysis, amplification, electrophoresis, primers, polymerase, desoxiribonucleosidetriphosphates, scraping.