Лабораторні роботи

Паразитичні бактерії теж існують за рахунок інших організмів, але завдаючи їм при цьому шкоди. їх ще називають патогенними або хвороботворними, оскільки їх розмноження викликає захворювання організму. Насамперед це зумовлюється продуктами життєдіяльності цих бактерій, так званими токсинами (отрутами), які викликають підвищення температури, розлад важливих життєвих функцій, порушення гомеостазу тощо. Особливо небезпечні бактерії, які є збудниками тифу, холери, дезинтерії й можуть спричинити смерть людини. Тому бактеріальні аналізи - необхідна складова досліджень води джерел, які використовуються для пиття, купання тощо.

Патогенні бактерії потрапляють у воду головним чином із неочищених чи погано очищених комунальних стоків, сміттєзвалищ, вигрібних ям тощо. Методи виявлення бактерій досить трудомісткі й дорогі, вони ґрунтуються на складних біохімічних аналізах й доступні лише спеціалізованим, добре обладнаним лабораторіям. Проте існує досить простий метод оцінки бактеріальної забрудненості води - визначенням колі-титру. Суть його полягає в тому, що у воді визначається присутність певного типу бактерій, а саме коліформних. Це бактерії-коменсали, які знаходяться в товстому кишечнику людини. Щоденно мільярди їх потрапляють у природне середовище з екскрементами. 80-95 % цих бактерій представлено видом Eschericahia (Е. соlі). Тому наявність коліформних бактерій вказує на забрудненість води фекаліями. Коліформні бактерії зберігають життєздатність поза межами людського організму значно довше, ніж патогенні. Розроблено прості методи їх визначення, тому метод колі-титру широко використовується у всьому світі для оцінки бактеріальної забрудненості водних джерел.

Варто пам'ятати, що самі собою коліформні бактерії не є небезпечними для людини: їх наявність у воді свідчить про те, що вона забруднена фекаліями, і отже, може містити патогенні мікроорганізми. У різних країнах існують санітарні норми щодо наявності у воді коліформних бактерій; перевищення цих норм свідчить про потенційну небезпеку використання води для пиття чи купання.

Отже, колі-титр є необхідною складовою екологічної оцінки водного джерела. Розроблено різні методи виявлення й кількісної оцінки коліформних бактерій. Найпростіші з них - Хатч і Мілліпор (за назвами фірм, що їх розробили). Обидва методи базуються на здатності коліформних бактерій розмножуватися на певних поживних середовищах та утворювати там колонії, які легко виявляються неозброєним (або з використанням лупи) оком. Склад поживних середовищ підібрано так, що на них розмножуються лише коліформні бактерії.

Метод Хатч. Компанія Хатч випускає спеціальні набори для цього аналізу. Кожен з них містить пакети з поживними сумішами і пробірки з пробками (все стерилізоване). Аналіз передбачає два послідовні етапи визначення: перший - чи є взагалі у воді колі-бактерії; другий - якщо є, то скільки.

Матеріали й обладнання: 5 наборів Хатч для визначення наявності колі-бактерій (що містять сухий лактозний бульйон); 5 інших наборів Хатч - для визначення кількості колі-бактерій на 100 мл води (що містять сухий лактозно-жовчний бульйон).

 

Хід роботи

Якісний аналіз методом Хатч. Старанно вимийте руки з милом. Відкрийте набір. Не торкайтесь руками внутрішньої частини набору й кришки, оскільки можете занести туди бактерії. Наповніть набір водою, що аналізується, й закрийте кришкою. Зачекайте, поки поживний бульйон розчиниться у воді, потім переверніть набір, щоб внутрішня пробірка наповнилась цим розчином. Простежте, щоб у внутрішній пробірці не було бульбашок повітря. Повторіть процедуру з чотирма іншими наборами. Поставте всі 5 наборів у тепле місце, бажано в термостат при температурі 35 ± 0,5 °С. Через 1 год. знову переверніть набори, щоб видалити бульбашки повітря, яке могло виділитися з розчину внаслідок нагрівання. Поверніть набори знову до термостата.

Якщо протягом 12-24 год. у внутрішніх пробірках спостерігається газ, то коліформні бактерії присутні. Якщо газу немає, поверніть набори в термостат ще на добу. Якщо й протягом цього часу в пробірках газ не утвориться, коліформні бактерії у воді відсутні.

Кількісний аналіз методом Хатч. Проводиться лише при позитивних результатах першого аналізу. Строго кажучи, перший аналіз не дає однозначної відповіді, чи є у воді колі-бактерії, оскільки існують (хоч і рідко) інші види бактерій, що розмножуються в лактозному бульйоні, а отже, викликають виділення вуглекислого газу.

Для порівняння наявності колі-бактеріи та оцінки їх кількості проводиться другий аналіз. Розглянемо його. Відкрийте кришку другого набору Хатч й перелийте вміст першого набору в другий. Переверніть набір, щоб вилучити бульбашки повітря з внутрішньої пробірки. Повторіть цю процедуру з іншими чотирма наборами. Помістіть другий набір у термостат й витримайте його там при температурі 35±0,5 °С протягом 48±3 год. Утворення газу в пробірках свідчитиме про наявність у воді колі-бактерій. їх кількість визначте за таблицею 2.

Метод Мілліпор. Ґрунтується на застосуванні мембранних фільтрів (це тонкі пластикові пластинки з дрібними порами, що затримують всі бактерії з води, яка прокачується крізь ці фільтри). Певний об'єм води прокачується крізь фільтр на поверхню поживної суміші, бактерії розмножуються там і утворюють колонії, які легко спостерігаються неозброєним оком. Кожна така колонія представляє одну бактерію, що була у воді.

У наборі Мілліпор є інструкція, яка роз'яснює, як оцінити загальну кількість бактерій у воді й окремо колі-бактерій. Для полегшення підрахунку колоній застосовується попереднє розведення води, що аналізується, дистильованою водою - набагато легше визначити 10 колоній з 1 мл води, розведеної 99 мл дистильованої води, ніж рахувати 1000 колоній у 100 мл води. Звичайно, при остаточному підрахунку кількості бактерій вводиться поправка