Вміст біологічно-активних речовин у фолікулярній рідині та їх вплив на процеси запліднення ооцитів і розвиток ембріонів in vitrо при безплідності

Морально-этические проблемы вспомогательных репродуктивных технологий // Тези доповідей міжнародного симпозіуму ''Біоетика на порозі III тисячоліття». – Харків, – 2000. – С. 98 – 99 (співавт. : Грищенко В. И., Петрушко М. П., Пиняев В. И., Юрченко Г. Г. ; огляд літератури, збір матеріалу).

Влияние активности антиоксидантных ферментов в фолликулярной жидкости человека на оплодотворение ооцитов и развитие эмбрионов при лечении бесплодия с использованием вспомогательных репродуктивных технологий // Збірник тез конференції молодих вчених “Медицина третього тисячоліття”. – Харків, – 2001. – Т. 3. – С. 48 (співавт. : Петрушко М. П., Піняєв В. И., Рязанцев В. В. ; збір матеріалу, огляд літературних джерел, статистична обробка, підготовка до друку).

Оптимизация программы экстракорпорального оплодотворения путем использования биологически активных сред // Збірник наукових праць. Асоціація акушерів – гінекологів України. – К. : “Фенікс”, 2001. – С. 173 – 175 (співавт. : Грищенко В. И., Геродес А. Г., Петрушко М. П., Пиняев В. И. ; огляд літературних джерел).

Влияние интенсивности перекисного окисления липидов в фолликулярной жидкости человека на развитие эмбрионов при лечении бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения // Збірник тез конференції молодих вчених “Медицина третього тисячоліття”. – Харків, – 2002. – С. 113 (співавт. : Петрушко М. П., Піняєв В. И., Рязанцев В. В. ; огляд літературних джерел, збір матеріалу та його аналіз, підготовка до друку).

Интенсивность процессов перекисного окисления липидов в фолликулярной жидкости в естественных менструальных циклах и в программе оплодотворения in vitro // Збірник наукових праць Асоціації акушерів – гінекологів України. – К. : “Інтермед”, 2002. – С. 163 – 165.

 

 

Грищенко М. Г. Вміст біологічно-активних речовин у фолікулярній рідині та їх вплив на процеси запліднення ооцитів і розвиток ембріонів in vitrо при безплідності. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 14. 01. 01 – акушерство та гінекологія. Харківський державний медичний університет МОЗ України, Харків, 2002.

Дисертаційна робота присвячена вивченню обміну простагландинів, стану процесів перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) і антиоксидантних ферментних систем у фолікулярній рідині (ФР) у фізіологічних менструальних циклах і при лікуванні безплідності в програмі запліднення in vitro (ЗІВ). Проведено комплексне дослідження, що включало визначення в ФР концентрації простагландинів E2 і F2, вмісту продуктів перекисного окислення ліпідів, активності антиоксидантных ферментних систем у фізіологічних циклах і в програмі ЗІВ. Для вирішення поставлених в роботі задач було обстежено 210 пацієнтів. Обстежили 90 подружніх пар, що звернулися для лікування безплідності і були включені в програму ЗІВ. Контрольну групу (n=30) складали пацієнтки в фізіологічних циклах, яким у плановому порядку було показано оперативне лікування з приводу захворювань, не пов'язаних з патологічними змінами тканини яєчників.

У результаті досліджень виявлено, що в ФР, отриманій в програмі ЗІВ, інтенсивність процесів ПОЛ і синтезу Pg F2 значно перевищує відповідні показники в зразках пацієнток у фізіологічних циклах, що свідчить про вихід цих процесів у преовуляторному фолікулі при стимуляції суперовуляції за фізіологічні межі. Ці дані вказують на підвищену небезпеку впливу реактивних кисневих сполук на ооцити при лікуванні безплідності в програмі ЗІВ

При аналізі результатів визначення концентрації продуктів ПОЛ і активності антиоксидантных ферментних систем у циклах ЗІВ із різним відсотком запліднення ооцитів in vitro виявлено збільшення інтенсивності процесів ПОЛ і одночасна неспроможність антиоксидантных систем у випадках з незадовільними результатами лікування. В ряді спостережень отримані результати дозволили уяснити причини неефективного лікування в програмі ЗІВ. Виявлено певний зв'язок між співвідношенням Pg E2/F2 і темпами дроблення ембріонів in vitro. Вперше виявлена залежність між активністю антиоксидантного ферменту супероксиддисмутазы у ФР і морфологією ооцитів, отриманих у результаті стимуляції суперовуляції, темпами дроблення і морфологією ембріонів у програмі ЗІВ.

На підставі отриманих даних удосконалена система обстеження подружніх пар у програмі ЗІВ, визначені оптимальні показники концентрації простагландинів E2 і F2 у ФР, розроблені критерії прогнозування результатів ембріологічного етапу програми ЗІВ.

Ключові слова: безпліддя, фолікулярна рідина, запліднення, простагландини, перекисне окислення ліпідів, антиоксидантні ферменти.

 

 

Грищенко Н. Г. Содержание биологически-активных веществ в фолликулярной жидкости и их влияние на процессы оплодотворения ооцитов и развитие эмбрионов in vitro при бесплодии. – Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальности – 14. 01. 01 – акушерство и гинекология. Харьковский государственный медицинский университет МЗ Украины. Харьков, 2002.

Диссертационная работа посвящена изучению обмена простагландинов, состояния процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантных ферментных систем в фолликулярной жидкости (ФЖ) в физиологических менструальных циклах и при лечении бесплодия в программе оплодотворения in vitro (ОИВ). Проведено комплексное исследование, включающее определение в ФЖ человека концентрации простагландинов E2 и F2, содержания продуктов перекисного окисления липидов – малонового диальдегида (МДА) и диеновых конъюгатов (ДК), активности антиоксидантных ферментов – каталазы, глутатионпероксидазы (ГП), глутатионредуктазы (ГР), супероксиддисмутазы (СОД), концентрации восстановленного глутатиона (GSH) в естественных циклах и в программе ОИВ. Для решения поставленных в работе задач было обследовано 210 пациентов. Обследовали 90 супружеских пар, которые обратились для лечения бесплодия и были включены в программу ОИВ. Контрольную группу (n=30) составили пациентки в естественных циклах, которым в плановом порядке было показано оперативное лечение по поводу заболеваний, не связанных с патологическими изменениями ткани яичников.

В результате проведенных исследований обнаружено, что в ФЖ, полученной в программе ОИВ, интенсивность процессов перекисного окисления липидов и синтеза Pg F2 значительно превышает соответствующие показатели в образцах от пациенток в естественных циклах, что свидетельствует о выходе этих процессов в преовуляторном фолликуле при стимуляции суперовуляции за пределы физиологических границ. Эти данные указывают на повышенную опасность воздействия реактивных кислородных соединений на ооциты при лечении бесплодия в программе ОИВ.

При анализе результатов определения концентрации продуктов перекисного окисления липидов и активности антиоксидантных ферментных систем в циклах ОИВ с различным процентом оплодотворения ооцитов in vitro обнаружено увеличение интенсивности процессов ПОЛ и одновременная несостоятельность антиоксидантных систем в случаях с неудовлетворительными результатами лечения. Полученные результаты в ряде наблюдений позволили объяснить причины неэффективного лечения в программе ОИВ.

При сопоставлении результатов измерения в ФЖ концентрации простагландинов, продуктов перекисного окисления липидов и активности антиоксидантных ферментных систем в стимулированных циклах – было установлено, что выбор схемы стимуляции суперовуляции не оказывает влияния на исследованные показатели.

Обнаружена выраженная связь между соотношением Pg E2/F2 и темпами дробления эмбрионов in vitro. Впервые выявлена зависимость между активностью антиоксидантного фермента СОД, концентрацией GSH в ФЖ, морфологией ооцитов, получаемых в результате стимуляции суперовуляции, темпами дробления и морфологией эмбрионов в программе ОИВ.

Комплексное определение активности СОД, концентрации GSH, МДА и ДК, соотношения Pg E2/F2 в ФЖ предложено в качестве методики, позволяющей оценить степень перекисных воздействий на ооцит. Проведение указанного набора исследований даст возможность прогнозировать способность ооцитов к оплодотворению in vitro, развитие морфологически полноценных эмбрионов, пригодных для переноса в полость матки при лечении бесплодия в программе ОИВ. Использование предложенных методов в комплексе позволит значительно более точно прогнозировать результаты лечения и, возможно, увеличить эффективность лечения бесплодия в программе ОИВ.

Установлено, что исследование активности СОД в фолликулярной жидкости является быстрым, методически простым, неинвазивным, высокоинформативным методом, что позволяет рекомендовать его в качестве экспресс-метода для определения способности ооцитов к оплодотворению in vitro

Таким образом, на основании полученных данных усовершенствована система обследования супружеских пар в программе ОИВ, определены оптимальные показатели концентрации простагландинов E2 и F2 и продуктов перекисного окисления липидов в ФЖ, разработаны критерии прогнозирования результатов эмбриологического этапа программы ОИВ.

Ключевые слова: бесплодие, фолликулярная жидкость, оплодотворение, простагландины, перекисное окисление липидов, антиоксидантные ферменты.

 

 

Grishchenko N. G. Content of biologically active substances in human follicular fluid and their effect on fertilization process and in vitro embryo development by sterility. – Typescript.

Thesis for candidate’s degree by specialty 14. 01. 01 – obstetrics and gynecology. – Kharkov State Medical University, 2002.

Since the birth of Louise Brown in 1978, there are today more then 300000 children all over the world, who have been born after in-vitro fertilization procedure (IVF). Technology in assisted human reproduction keep developing; starting from the first pregnancy using frozen embryos in the early 1980s to sex-selection of embryos and the microinjection of spermatozoa (ICSI) to treat male sterility at the end of the 20th century.

At present, the efficiency of infertility treatment with IVF procedure reaches 20 – 30% per one attempt. High morphological and functional quality of oocyte is necessary for normal fertilization and embryo development.

Follicular fluid is formed by a gradual influx of fluid derived from blood and by compounds synthesized and secreted by theca and granulosa cells. Therefore, its composition reflects both the plasma composition and the secretory activity of theca and granulosa cells. Follicular fluid contacts with oocyte during the whole process of its maturation. Intensified peroxidation in the Graafian follicle can probably be a factor compromising the normal development of the oocytes and embryos.

The purpose of this research was to study concentrations of two oxidative stress markers (thiobarbituric acid-reactive substances and conjugated dienes) ; as well as certain compounds of antioxidant enzyme systems and prostaglandins E2 and F2a content in preovulatory follicular fluid of women attending an in-vitro fertilization program.

There was found certain dependence between concentration of oxidative stress markers in follicular fluid and capacity of oocytes to fertilization in vitro.

There was also detected some strong relationship between Pg E2/F2a ratio, SOD – activity, reduced glutathione concentration in human follicular fluid and ability of oocytes for fertilization in vitro.

The rising intensity of lipid peroxidation in follicular fluid influences negatively morphological and functional characteristics of oocytes as well as embryo quality. Determination of Pg E2/F2a ratio, oxidative stress markers, SOD – activity and reduced glutathione concentration in follicular fluid may be used as prognosticating criterion of oocytes’ ability to fertilize by using assisted reproductive technologies.

Key words: infertility, follicular fluid, fertilization, prostaglandin, lipid peroxidation, antioxidant enzymes.

 

 

ДРТ – допоміжні репродуктивні технології

ГП – глутатіонпероксидаза

ГР – глутатіонредуктаза

ГТ – глутатионтрансфераза

ДК – дієнові кон'югати

МДА – малоновий діальдегід

ЗІВ – запліднення «ін вітро»

ПОЛ – перекісне окислювання ліпідів

РКС – реактивні кисневі сполуки

СОД – супероксиддисмутаза

ФР – фолікулярна рідина

GSH – відновлена форма глутатіона

ICSI – intracytoplasmic sperm injection

Pg – простагландин