Бактеріальні хвороби плодових культур Закарпатської області

Оскільки некрози або інші симптоми ураження на тютюні можуть викликатися тільки фітопатогенними бактеріями (не сапрофітами), то цей метод можна застосувати для швидкого відбору патогенного ізолята. Вивчати слід лише той ізолят, який індукує некрози на індикаторній рослині [19].

Зберігання бактеріальних культур. Зазвичай фітопатогенні бактерії зберігають свою вірулентність в лабораторних умовах тривалий час, але деякі види втрачають життєздатність відносно швидко. Псевдомонади залишаються життєздатними протягом багатьох місяців без пересіву, в той час як ксантомонади гинуть протягом 1-2 тижнів при рості на звичайних і використовуваних бактеріальних середовищах [19].

Методика діагностики опіку плодових Erwinia amylovora. Прискорена діагностика опіку плодових Erwinia amylovora.

Перший день:

А) Попередня діагностика Е. amylovora шляхом постановки реакції преципітації без виділення збудника:

 

Рис 2.1. Кільця преципітації у 2-й та 4-й пробірках [8]

 

1. Стерильним скальпелем на межі ураженої і здорової кори роблять зрізи, добре подрібнюють і кладуть 1 грам в пробірку з 10 мл фізрозчину, який містить 5% сахарози;

2. Ставлять в термостат на 1 годину;

3. Частину приготовленої суміші кип'ятять протягом 30 хвилин;

4. Охолоджують і відбирають 1 мл екстракту, добавляють 0,5 мл нор-мальної кролячої сироватки;

5. Витримують в термостаті протягом 30 хв. при температурі 37°С і центрифугують 5 хв. при 3000 обертів.

6. В преципітаційні пробірки вносять: в одну 0,25 мл нормальної, в другу - 0,25 мл імунної до Е. amylovora сироватки крові кролика;

7. Із центрифугату обережно набирають надосадову рідину пастерівсь-кою піпеткою і обережно нашаровують її спочатку на поверхню нормальної, а потім імунної сироватки в преципітаційних пробірках. Облік реакції проводять через 30 хв., 2 години, 4 години (рис 2.1) [8].

Б) Зараження незрілих плодів груші чутливих сортів до Erwinia amylovora екстрактом з кори зразків: з некип'яченого екстракту, підготов-леного раніше для реакції кільцепреципітації, шприцом відбирають 0,5 мл рідини, нею інфікують попередньо вимиті і протерті 5% розчином перекису водню плоди груші і ставлять їх у вологу камеру при температурі 27°С. Облік проводять через 24,48 і 72 години.

При позитивній реакції спостерігається утворення на поверхні плода білої рідини (рис 2.2).

 

Рис. 2.2. Позитивна реакція Уайта 

(виділення молочно-білого ексудату)[8]

 

В) Виділення бактерій на середовища:

З цього ж екстракту роблять висів бактерій на середовище Кінга та картопляний агар з дріжджовим екстрактом. Облік проводять через 24, 36,48 годин[4].

Другий день:

При наявності на середовищі Кінга нефлюорисцируючих слизистих колоній проводять їх відбір і сіють на селективні середовища Б3 та Кросса і Гурмана. 

Облік характеру росту проводять через 24, 48, 60 годин. Колонії Erwinia amylovora на середовищі 03 мають оранжеве забарвлення, колонії інших видів набувають голубого або зеленого кольору.

На середовищі Кроса і Гудмана бактерії Erwinia amylovora утворюють колонії з кратероподібним заглибленням по середині, що добре спостерігається під мікроскопом при збільшенні 15х або 30" [8].

Склад поживних середовищ для ізоляції та ідентифікації

Картопляний агар з дріжджовим екстрактом

Картопля - 200 г 

Агар-агар - 20 г

Дріжджовий екстракт – 10 мл

Водопровідна вода – 1000 мл

рН – 7,0 [8].

 

 

 

 

РОЗДІЛ 3

РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕНЬ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ

 

Дослідження проводились на базі Закарпатського територіального відділу карантину рослин УЗР УААН та кафедрі генетики, фізіології рослин і мікробіології ДВНЗ «УжНУ».

Для визначення основних бактеріальних захворювань плодових рослин, які є небезпечними на даний період в Закарпатській області, були використані дані по виявленню карантинних бактеріальних хвороб в регіоні за 2007-2013 рр. та проаналізовані результати маршрутних обстежень, здійснювані спільно з співробітниками Закарпатського територіального відділу карантину рослин УЗР УААН (таблиця 3.1.).

Обстеженню підлягали насадження зерняткових, кісточкових плодових дерев, а також декоративних та дикорослих культур (глід, кизил, горобина, троянда, спірея, керія та ін). Особливо важливе значення мають обстеження розсадників, де вирощується посадковий і прищепний матеріал, до початку реалізації із них продукції. Проводився огляд вибірково в плодових та декоративних насадженнях регіону. Обстеження проводились у три строки: 

1-ранньовесняний (період розпускання бруньок і цвітіння),

2-літній (період інтенсивного росту дерев), 

3-осінній (період посиленого сокоруху).

У весняний період проводили суцільне обстеження, де оглядали кожне дерево. Влітку і восени обстеження проводили вибірково, оглядаючи кожне десяте дерево. Звертали увагу на дерева, які пригнічені і висихають, мають пошкоджені квіти, кору та інші ознаки, які характерні для бактеріозів, що визначаються як карантинні.

 

Таблиця 3.1

Обстеження плодових культур на виявлення карантинних бактеріальних захворювань в Закарпатській області(2007-2013рр.)

№

п/пДатаМісце обстеженняКультураРезультат

Ужгородський р-н

126.07.2007с. СторожницяЯблуняЕrwinia аmуlovora

226.07.2007с. СторожницяГрушаЕ. аmуlovora

326.07.2007с. Малі ГеївціГрушаP. agolovera

426.07.2008с. ЧервонеГрушаЕ. аmуlovora

518.08.2008с. ЧервонеГрушаЕ. аmуlovora

618.08.2008с. ЧервонеАйва–

708.04.2009с. СеленціГрушаЕ. аmуlovora

823.05.2009с. Нижнє СолотвиноАбрикосЕ. аmуlovora

905.06.2009с. СеленціГрушаЕ. аmуlovora