Технологія спирту

Розчин крохмалю готують в день проведення аналізу.

 

 Приготування фосфатного буферного розчину з рН 5,6 і рН 6,0

Змішують розчини фосфорнокислого натрія і фосфорнокислого калія концентрацією 1/15 моль/дм3 у співвідношенні 0,5:9,5 (для рН 5,6) і 1:9 (для рН 6,0).

Величину рН перевіряють на приладі. У випадку відхилення рН буферу від вимагаємого значення, відповідні розчини доводять до норми.

 

 Приготування основного розчину йоду

0,50 г йоду і 5,00 г йодистого калію розчиняють в бюксі з притертою кришкою в невеликій кількості води.

Вміст бюксу перемішують на магнітній мішалці при закритій кришці бюксу.

Розчин після повного розчинення йоду переносять в мірну колбу з притертою пробкою місткістю 200 см3 і об’єм доводять дистильованою водою до мітки.

Основний розчин йоду зберігають протягом 1 місяця у склянці із темного скла з притертою пробкою.

 

 Приготування робочого розчину йоду

2 см3 основного розчину йоду розводять розчином соляної кислоти концентрацією 0,1 моль/дм3 при аналізі препаратів бактеріального походження із передбаченою активністю більше 50 од./см3 в мірній колбі місткістю 100 см3.

Перед застосуванням робочого розчину перевіряють його оптичну густину в діапазоні довжин хвиль 434-450 нм в кюветах з товщиною поглинаючого світло шарі 10 мм.

Оптична густина робочого розчину йоду повинна дорівнювати 0,220 (±0,01).

У випадку відхилення від цього значення додають до розчину кілька крапель соляної кислоти або основного розчину йоду.

 

 Приготування основного розчину очищених ферментних препаратів

0,1000-1,000 г дослідного препарату (в залежності від передбачуваної  активності) розчиняють в невеликій кількості води, при необхідності старанно розтираючи скляною паличкою, кількісно переносять в мірну колбу місткістю 100 см3, доводять дистильованою водою до мітки і перемішують. Препарати з нерозчинними наповнювачами фільтрують. Розчин зберігають протягом доби при температурі від 2 до 6°С.

 

Приготування робочого розчину очищених 

ферментних препаратів

 

Робочий розчин готують у відповідності до таблиці 1 із основного розчину (для наважки 0,1000 г), розбавляючи його дистильованою водою таким чином, щоб в 5 см3 робочого розчину містилась маса ферменту, яка забезпечувала б в прийнятих умовах гідроліз крохмалю від 20 до 60 %.

 

Таблиця 1.

  Амілолітична активність (АС), од./Г  (передбачувана)Маса препарату в 5 см3 робочого розчину (m1), мгОб’єм основного розчину, необхідний для вторинного розбавлення, см3Загальний об’єм розбавленого розчину, см3

Від 20 до 80 включно5,050,050,0

Від 80 до 150 включно2,020,050,0

Від 150 до 300 включно1,010,050,0

Від 300 до 700 включно0,55,050,0

Від 700 до 1200 включно0,2510,0200,0

Від 1200 до 2500 включно0,1255,0200,0

Від 2500 до 5000 включно0,052,0200,0

Вище 50000,0251,0200,0

 

Робочий розчин ферментного препарату готують безпосередньо перед визначанням.

 Приготування основного розчину із повітряно-сухої 

культури гриба 

5,00 г досліджуваної повітряно-сухої культури гриба,  попередньо розтертої в ступці, переносять в конічну колбу місткістю 250 см3, додають 90 см3 дистильованої води і 10 см3 ацетатного буферного розчину з рН 4,7. Суміш витримують протягом 1 год в термостаті при температурі (30,0±0,2)ºС, періодично перемішуючи і потім фільтрують. Фільтрат використовують в якості основного розчину.

Фільтрат зберігають протягом доби при температурі від 2 до 6ºС.

 

 

 

 

 Приготування робочого розчину із повітряно-сухої 

культури гриба

Робочий розчин готують із основного розчину, розбавляючи його дистильованою водою, у відповідності до таблиці 2.

 

Таблиця 2.

  Амілолітична активність (АС),  культури гриба од./Г.,  (передбачувана)Маса культури гриба в 5 см3 робочого розчину (m1), мгОб’єм основного розчину, необхідний для вторинного розбавлення, см3Загальний об’єм розбавленого розчину, см3

Від 5 до 15 включно37,515100

Від 15 до 50 включно10,04100

Від 50 до 100 включно2,51100

Від 100 до 150 включно1,251200

Від 150 до 300 включно0,6250,5200

 

 Приготування основного розчину із культурної рідини бактеріального походження 

В мірну колбу місткістю 100 см3 наливають 90 см3 дистильованої води і вносять 1 см3 досліджуваної культури рідини. Об’єм доводять до мітки дистильованою водою.

Приготування робочого розчину із культуральної рідини

Робочий розчин готують із основного розчину, розбавляючи його дистильованою водою в мірній колбі місткістю 100 см3 у відповідності до таблиці 3.

 

Таблиця 3.

  Амілолітична активність (АС), культуральної рідини, од./см3  (передбачувана)Маса культуральної рідини в 5 см3 робочого розчину, см3Об’єм основного розчину, необхідний для вторинного розбавлення, см3

Від 10 до 25 включно0,0120,0

Від 25 до 50 включно0,00510,0

Від 50 до 75 включно0,003-0,00356,0-7,0

Від 75 до 100 включно0,00255,0

Від 100 до 125 включно0,00204,0

Від 125 до 150 включно0,00153,0

Вище 1500,001252,5

 

 

 

 

 

 Проведення визначання

Беруть дві пробірки, наливають в кожну по 10 см3 розчину крохмалю (субстрату) і ставлять в термостат або водяну баню з температурою (30±0,2)°С на 5-10 хв. Потім, не виймаючи пробірок із термостату, наливають в першу 5 см3 дистильованої води (контрольна пробірка), у другу – 5 см3 робочого розчину аналізованого продукту